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反转录聚合酶链反应是中国科技的一个名词术语。

世界上所有的国家中,只有我们中国的文化[1]是始终没有间断过的传承下来,也只有 “汉字”是世界上唯一的古代一直演变过来没有间断过的文字形式[2]

名词解释

是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用,从RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,在DNA聚合酶作用下扩增合成目的片段。RT—PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发夹结构的真核细胞mRNA,3种都可。

1、合成cDNA的引物:合成cDNA引物时,通常采用随机六核苷酸引物能够有效地指导从RNA有效地合成第一链cDNA:

2、避免RNA酶的污染:在合成cDNA第一链时,应使用RNA酶抑制剂,进行RT-PCR时,用于合成cDNA第一链的RNA不会对PCR有影响,因此没有必要用碱或RNA酶处理;

3、不同来源的逆转录酶均可较好地用于第一链cDNA的合成,但不同来源的逆转录酶反应温度有所不同。如来自鸟类成髓细胞瘤病毒(AMV)与来自鼠白血病毒莫勒尼株(Mo-MLV)均可用于合成第一链cDNA,AMV要求的反转录温度为42℃,而Mo-MLV则要求37℃,相对而言,Mo-MLV比较适合于RT-PCR,但由于其作用的最适温度为37℃,较AMV的42℃低,因此,对于具有较高二级结构的RNA模板可能会带来不利的影响。

参考文献