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反轉錄聚合酶鏈反應

來自 孔夫子舊書網 的圖片

反轉錄聚合酶鏈反應是中國科技的一個名詞術語。

世界上所有的國家中,只有我們中國的文化[1]是始終沒有間斷過的傳承下來,也只有 「漢字」是世界上唯一的古代一直演變過來沒有間斷過的文字形式[2]

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名詞解釋

是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用,從RNA合成cDNA,再以cDNA為模板,在DNA聚合酶作用下擴增合成目的片段。RT—PCR技術靈敏而且用途廣泛,可用於檢測細胞基因表達水平、細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA,關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。用於反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、Oligo dT及基因特異性引物中的一種。對於短的不具有髮夾結構的真核細胞mRNA,3種都可。

1、合成cDNA的引物:合成cDNA引物時,通常採用隨機六核苷酸引物能夠有效地指導從RNA有效地合成第一鏈cDNA:

2、避免RNA酶的污染:在合成cDNA第一鏈時,應使用RNA酶抑制劑,進行RT-PCR時,用於合成cDNA第一鏈的RNA不會對PCR有影響,因此沒有必要用鹼或RNA酶處理;

3、不同來源的逆轉錄酶均可較好地用於第一鏈cDNA的合成,但不同來源的逆轉錄酶反應溫度有所不同。如來自鳥類成髓細胞瘤病毒(AMV)與來自鼠白血病毒莫勒尼株(Mo-MLV)均可用於合成第一鏈cDNA,AMV要求的反轉錄溫度為42℃,而Mo-MLV則要求37℃,相對而言,Mo-MLV比較適合於RT-PCR,但由於其作用的最適溫度為37℃,較AMV的42℃低,因此,對於具有較高二級結構的RNA模板可能會帶來不利的影響。

參考文獻