反轉錄聚合酶鏈反應

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反轉錄聚合酶鏈反應是中國科技的一個名詞術語。

世界上所有的國家中，只有我們中國的文化是始終沒有間斷過的傳承下來，也只有 「漢字」是世界上唯一的古代一直演變過來沒有間斷過的文字形式。

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名詞解釋

是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用，從RNA合成cDNA，再以cDNA為模板，在DNA聚合酶作用下擴增合成目的片段。RT—PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表達水平、細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA，關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。用於反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、Oligo dT及基因特異性引物中的一種。對於短的不具有髮夾結構的真核細胞mRNA，3種都可。

1、合成cDNA的引物：合成cDNA引物時，通常採用隨機六核苷酸引物能夠有效地指導從RNA有效地合成第一鏈cDNA：

2、避免RNA酶的污染：在合成cDNA第一鏈時，應使用RNA酶抑制劑，進行RT-PCR時，用於合成cDNA第一鏈的RNA不會對PCR有影響，因此沒有必要用鹼或RNA酶處理；

3、不同來源的逆轉錄酶均可較好地用於第一鏈cDNA的合成，但不同來源的逆轉錄酶反應溫度有所不同。如來自鳥類成髓細胞瘤病毒（AMV）與來自鼠白血病毒莫勒尼株（Mo-MLV）均可用於合成第一鏈cDNA，AMV要求的反轉錄溫度為42℃，而Mo-MLV則要求37℃，相對而言，Mo-MLV比較適合於RT-PCR，但由於其作用的最適溫度為37℃，較AMV的42℃低，因此，對於具有較高二級結構的RNA模板可能會帶來不利的影響。