固定劑
介紹
這使得最終產品能夠保持其原有的香味之餘,同時其使用壽命更長。固定劑是香水工業不可或缺的部份。一般用來作固定劑的物質包括有:龍涎香、檀香木、麝香、香根草、鳶尾根和香檸檬。在某些情況下,例如生產肥皂時,也可使用蓖麻油。固定劑由於其低揮發度,固定劑的香味在香水方面的語言會稱之為其主調或基調。
種類
- 四氧化鋨(Osmium tetroxide)
- 甲醛(formaldehyde)
- 戊二醛(glutaraldehyde)
- 其它固定劑
- 醋酸鈾(uranyl acetate)}既是一種固定劑又是一種染色劑。它可以與磷酸基團反應,從而固定DNA和RNA,以及含有磷酸基團的磷脂,從而對膜結構的保存有幫助。另外,它可以與蛋白中的酸性基團(如天冬氨酸殘基、穀氨酸殘基)和鹼性基團(如賴氨酸殘基)反應,從而起固定蛋白的作用。但醋酸鈾不能很好得保存糖原。通常在使用了醛類固定劑和四氧化鋨固定劑後,再使用$0.5-1.0\%$的醋酸鈾水溶液,進行第三重固定。操作醋酸鈾時要特別注意,儘管市售的醋酸鈾放射性不強,但它仍是一種潛在的致癌物。醋酸鈾應密封於棕色瓶陰涼處保存。
- 丙烯醛(acrolein)是一種三碳醛,含有一個醛基和一個雙鍵。它比甲醛和戊二醛活潑,滲透組織的速度也比甲醛和戊二醛快。它可以很好地保存蛋白和磷脂,最好作為甲醛或戊二醛固定液的添加劑使用。通常使用市售密封的100%丙烯醛液體,固定時使用的濃度小於1%。它溶於水的速度慢,毒性很大,着火點低,儲存和使用它都比上述另外兩種醛類危險,非必要時不推薦使用。丙烯醛非常活潑且揮發性很強,即使是操作稀釋後的溶液也要格外小心,所有與丙烯醛相關的操作絕不能離開通風櫥進行,並且最好有經驗豐富的操作者在場指導。丙烯醛適合於固定大塊的樣品,植物組織或有厚細胞壁的微生物樣品,以及表面覆蓋有幾丁質或蠟質的樣品。但丙烯醛不適用於整個動物的灌注固定。
- 丹寧酸(Tannic acid)是一種從植物中提取的物質,泛指五倍子酸(gallic acid)糖苷或多聚糖苷。大分子很難滲透到組織中,因此電鏡中使用低分子量的丹寧酸。丹寧酸既是一種強的固定劑,能固定許多蛋白以及糖類衍生物,又是一種媒染劑,能增強對重金屬(如鈾、鉛)的吸收,從而增強樣品反差,特別是細胞外膜、彈性纖維、細胞連接、肌肉纖維等。由于丹寧酸滲透速度慢,通常只用作滲透速度快的固定劑的添加劑使用。丹寧酸沒有固定的用法,0.5-2.0%丹寧酸和0.5mg/ml皂角苷(saponin,增加丹寧酸的滲透速度)與2.5-4.0\%戊二醛一起使用可以得到良好的效果。但固定時間要延長到3-4小時以上,並且推薦使用醋酸鈾作第三重固定。丹寧酸適用於灌注固定。
- 重鉻酸鉀(potassium dichromate)在固定中有兩種作用,一是緩衝作用,二是固定作用,幫助保存脂類和糖類。在處理神經組織樣品時,因為重鉻酸鉀能很好地保存髓磷脂,可與四氧化鋨配合使用,作為第二重固定劑。但需要注意的是,重鉻酸鉀是一種致癌物質,應小心操作。
- 高錳酸鉀(potassium permanganate)可以與脂類反應,增強膜結構的反差。可以保存DNA和糖原,但有一定的抽提作用,幾乎無法固定細胞內的顆粒性或纖維狀結構,可能會引入一些假象。穿透性強,適用於有厚細胞壁或蠟質層包被的植物及昆蟲樣品。使用時可以不加緩衝液,固定時間不宜太長,,0.5-1.0%高錳酸鉀溶液固定30分鐘到2小時。