生化反應
基本信息
特點
和普通的化學反應相比,它具有以下的特點:
1、在生物體中所進行的生物化學反應都是遠離平衡點的反應,它需要從外界獲取能量或向外界輸出物質、能量和熵。
2、參與反應的蛋白質一般都是固定在膜上或細胞骨架上,使細胞內每時每刻所進行的成千上萬種生物化學反應,猶如行駛在具有立交的高速路上機動車,各行其是,互不干擾。例如細胞核中DNA的複製、轉錄都必須附着在核骨架上才能正確進行。
3、細胞中生物化學反應的主要類型是氧化還原反應,電子在定位於膜上或骨架上的蛋白質之間進行高速傳遞。例如電子傳遞鏈(內膜嵴)、光合作用(類囊體膜上)
4、由於細胞中的生物化學反應是在膜分隔的空間中進行,因此存在着位置信息效應,即生物大分子只有在特定位置發生反應,其特定功能才能得以發揮。例如,RNA轉錄、加工只在核中一定區域進行;蛋白質生物合成是在細胞質中進行。
線粒體和葉綠體只能合成自己需要的一小部分蛋白質,糖酵解發生在細胞質中,三羧酸循環發生在線粒體基質中。
5、膜的分隔使細胞中的生物化學反應成為一種由濃度梯度驅動的方向性化學反應。例如,溶酶體膜上V-型ATP酶,葉綠體類囊體膜上的F-型ATP酶等都是由H+濃度梯度驅動。
6、細胞內所進行的生物化學反應都需要有酶的催化。酶的催化效率高,反應條件溫和,具有方向性,對底物有高度專一性。
7、生物體或細胞中所進行的生物化學反應,在複雜的網絡體系中都可以通過正、負反饋得到自動調控。而載着反饋過程藍本的基因負責調製機體應如何讀、如何理解同一基因。
8、在生物體中所進行的生物化學反應,從本質上說都是由一種或幾種作用物與受體蛋白等相互選擇引起的。例如,激素、神經遞質等通過與特定的受體蛋白結合形成複合物,在由後者引發一系列化學或物理的連鎖反應、酶對底物的選擇等。
與水反應
全自動生化分析儀與化學發光分析儀有何不同
什麼是化學發光?
之前的一篇文章,我們講了化學發光是免疫診斷的一種,是利用抗原抗體之間的特異性反應來測定體內疾病標誌物濃度,從而判斷人體身體狀態的診斷方法,廣泛應用於傳染病、心臟疾病、腫瘤、妊娠檢測等。
對於生化診斷來說,生化診斷測試的糖類,脂肪類等在人體內的含量普遍為g/L-μg/L水平。
而對於化學發光來說,被檢測物質的濃度低,免疫診斷的對象抗原、抗體等僅為μg/L—pg/L水平, 造成對整個檢測系統的精密度要求高,儀器與試劑體系封閉;化學發光自動化難度高,對技術有更高的要求。
目前主流的化學發光技術有直接化學發光(異魯米諾(新產業)、吖啶酯(雅培))、間接(酶促)化學發光(丹納赫、邁瑞、安圖)、電化學(羅氏),各有優劣勢。
今天這篇文章我們主要來講講化學發光
化學發光(chemiluminescence)是指伴隨化學反 應過程所產生的光的發射現象。某些物質(發光劑) 在化學反應時,吸收了反應過程中所產生的化學能, 使反應的產物分子或反應的中間態分子中的電子躍 遷到激發態,當電子從激發態回復到基態時,以發 射光子的形式釋放出能量,這一現象稱為化學發光。
化學發光免疫分析的類型
一.直接化學發光免疫分析
用吖啶酯直接標記抗體(抗原),與待測標本中相應的抗 原(抗體)發生免疫反應後,形成固相包被抗體-待測抗原吖啶酯標記抗體複合物,這時只需加入氧化劑(H2 O2)和 NaOH使成鹼性環境,吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、 發光 。 由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時間內所產生 的光子能,這部分光的積分與待測抗原的量成正比,可從 標準曲線上計算出待測抗原的含量。
二.化學發光酶免疫分析
化學發光酶免疫分析(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA)是用參與催化某一化學發光反應的酶 如辣根過氧化物酶(HRP)或鹼性磷酸酶(ALP)來標記抗原或抗 體,在與待測標本中相應的抗原(抗體)發生免疫反應後,形成 固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體複合物,經洗滌後,加入 底物(發光劑),酶催化和分解底物發光,由光量子閱讀系統接 收,光電倍增管將光信號轉變為電信號並加以放大,再把它們 傳送至計算機數據處理系統,計算出測定物的濃度。
(1) 辣根過氧化物酶標記的化學發光免疫分析
該分析系統採用辣根過氧化物酶(HRP)標 記抗體(或抗原),在與反應體系中的待測標 本和固相載體發生免疫反應後,形成固相包 被抗體-待測抗原-酶(HRP)標記抗體複合 物,這時加入魯米諾發光劑、H2O2和化學發 光增強劑使產生化學發光。
(2) 鹼性磷酸酶標記的化學發光免疫分析
該分析系統以鹼性磷酸酶 標記抗體(或抗原), 在與反應體系中的待測標本和固相載體發生 免疫反應後,形成固相包被抗體-待測抗原-酶 標記抗體複合物,這時加入AMPPD發光劑, 鹼性磷酸酶使AMPPD脫去磷酸根基團而發光。
三.電化學發光
電化學發光免疫分析 (electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA)是以電化學發光劑三聯吡啶釕標記 抗體(抗原),以三丙胺(TPA)為電子供體, 在電場中因電子轉移而發生特異性化學發光 反應,它包括電化學和化學發光兩個過程。
主流的發光技術各有千秋, Roche(電化學)在腫瘤項目上占優,雅培(吖啶酯)在傳染病項目上占優,而丹納赫(ALP)在甲功激素項目上占優。
化學發光和熒光免疫的區別是什麼
化學發光是利用化學反應產生的能量促使產生能級躍遷,從而發光,典型的如魯米諾檢測血跡;熒光是一種光致發光現象,必須提供光源去激發分子產生能級躍遷,進而發光。
使用上述兩種方法進行免疫分析時,其區別很明顯,化學發光無需外加光源,背景干擾小;而熒光則需要外加光源,在垂直光源的方向上檢測,生物樣品中的蛋白質、氨基酸等分子也會產生背景熒光,背景稍高一些,需要選擇合適的熒光試劑,以及樣品處理方法以減少非特異性吸附蛋白的影響。