土地革命
民国十六年(1927年)8月1日，周士第率部参加南昌起义，任第25师师长。起义军南下广东失利后，辗转香港、南京、上海、西安、福建等地，曾参加邓演达领导的中国国民党临时行动委员会和黄埔革命同学会，参与策划推翻蒋介石。[7]
民国二十年(1931年)夏，周士第被捕，后在宋庆龄的营救下获释。[7]
民国二十一年(1932年)1月，上海淞沪抗战爆发后，周士第曾任上海抗日义勇军队长。[7]
民国二十二年(1933年)，福建事变后，周士第到蔡廷锴的第19路军参加反蒋活动，任第49师参谋处长、团长。同年底到中央苏区首府江西瑞金，任红军大学军事教员。