1994年底，闫妮提干调入[[空军政治部话剧团]]，也就是后来的[[空军电视艺术中心]]，参演的第一个话剧是《[[湘江·湘江]]》，但戏份极少，之后参加的一些话剧大多也都是[[跑龙套]]。1999年在电影《[[公鸡打鸣，母鸡下蛋]]》中闫妮主演女村长，这是她第一次出演女一号，导演[[尚敬 (导演)| [[ 尚敬]]从中看到了闫妮的喜剧才华，请她客串了《[[炊事班的故事]]》。2003年，尚敬执导电视剧《[[健康快车]]》，闫妮在其中出演了两个角色。

2005年因主演《武林外传》中的“佟湘玉”让她一炮走红，被人们所熟知。2008年主演电视剧《北风那个吹》、《三七撞上二十一》，2009年获第27届中国电视剧飞天奖，2010年获第25届中国电视金鹰奖。2009年6月，主演 [[ 张艺谋 ]] 执导的电影《三枪拍案惊奇》。2010年主演电影版《武林外传》。2011年主演电影《大魔术师》和《画壁》，其中《画壁》成为2011年国庆档票房冠军。2015年，主演电影《捉妖记》 。