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'''文学家''' ：赵壹 '''年 代''' ：汉代 '''文学体裁''' ：赋|}第一抗体就是能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。<ref>[https://www.360kuai.com/pc/94df6d916bf4b9bee?cota=4&kuai_so=1&tj_url=so_rec&sign=360_da20e874&refer_scene=so_3  一抗和二抗的区别，快资讯 2020年12月15日] </ref>

* 结果判定:可于白色背景上，直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以"+"、"-"号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。<ref>[https://www.bilibili.com/video/av40192223  何为一抗和二抗，为什么要加二抗？，B站 2019年1月8日] </ref>

* 同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml， 37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤 。<ref>[https://www.360kuai.com/pc/9a02e6c6c65cf9a54?cota=4&kuai_so=1&tj_url=so_rec&sign=360_da20e874&refer_scene=so_3  免疫组化二抗原理及选择?，快资讯 2020年12月3日] </ref>  == 注意事项 ==* 1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。* * 2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:* * (1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。当前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。* * (2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml 。** (3)酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取"方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。* * (4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是当前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。== 相关视频 == <div style="clear:center">{{#iDisplay:page/ a3039kq5vn5|740|420|qq}} == 相关资讯 =={{reflist}}[[Category:340 化學總論]]</div>