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1982年在影片《 [[ 预备警官 ]] 》中饰警校学员姚兰兰，成功走上银幕。

1984年在著名导演吴天明执导的影片《 [[ 人生（1984） ]] 》中饰女主角刘巧珍，在该片获得第八届《 [[ 大众电影 ]] 》百花奖最佳女演员奖 。

1987年在影片《 [[ 古堡小夜曲 ]] 》中饰演冷漠，高傲而又美丽的少女盛勤，表演上有了新的探索且有一定深度 。

1988年在喜剧片《 [[ 合同夫妻 ]] 》中饰演能干，倔强的惠妹，显示了自己在喜剧方面的表演才华。

1999年在影片《 [[ 女人的天空 ]] 》的饰演汪明慧，合作演员巫刚、高蓓蓓。同年与周里京合作饰演《 [[ 黄河人 ]] 》中夏茯苓一角 。

2000年在电视剧《 [[ 红色康乃馨 ]] 》饰演华工一角，合作演员奚美娟、李强、刘蓓。

2001年出演电视剧《 [[ 一路追击 ]] 》中瑞缨。同年，出演的电视剧《 [[ 涉外保姆 ]] 》是一部讲述上海涉外家政服务中下岗女工故事的电视剧。吴玉芳饰演金巧云，本剧塑造了一组自尊、自立、自强不息的下岗女工形象，她们以积极健康的心态、强烈进取的意识，在用勤劳的双手创造美好生活的同时，也融入时代的潮流，开始与世界对话，重新找到自己的人生价值。

2002年，出演了三部电视剧《 [[ 黑水 ]] 》、《 [[ 黑金 ]] 》、《 [[ 离婚女子驿站 ]] 》，分别饰演汪一梅、刘英、梁雅妮角色。

2003年出演《 [[ 醉拳 ]] 》梁明珠，《 [[ 我是有情人 ]] 》蓝绣，《 [[ 冰山下的来客 ]] 》茹青青。

2007年，搭档奚美娟、陶虹、王志飞出演电视剧《 [[ 保姆 ]] 》中的朱杨美丽一角。同年与马跃、张国庆一起出演《 [[ 生死英雄 ]] 》，饰演魏小荣 [13] 。

2009年出演电视剧《 [[ 蜗居 ]] 》，饰演徐丽，搭档张嘉译、李念、文章等，在各地播出均获得收视冠军。同年在《 [[ 重生门 ]] 》中饰演大太太。2009年，主演根据黄步千的小说《 [[ 濠河人家 ]] 》改编的电视电影《 [[ 濠河边上的女人 ]] 》。

2010年出演《 [[ 八千里路 ]] 》。

2011年在《 [[ 红娘子 ]] 》中饰演大太太 。在《 [[ 爱的契约 ]] 》中饰演钱母。在《 [[ 下一个奇迹 ]] 》中饰演梁母。还在电影《 [[ 倾城之泪 ]] 》中饰演秦师傅，合作的为[[李治廷]]、[[周冬雨]]、[[窦骁]]、[[陈乔恩]]等。

2012年与胡可、沙溢、王一楠一同出演《 [[ 孩奴 ]] 》 ，饰演项母一角。在《 [[ 那样芬芳 ]] 》饰演张慧中 。在《 [[ 泪洒女人花 ]] 》中出演秋香一角 [28-31] 。出演《 [[ 麻辣女友的幸福时光 ]] 》梁英一角。

2013年，吴玉芳一共出演了五部电视剧。分别是《 [[ 爱闪亮 ]] 》中陈玉，《 [[ 幸福相依 ]] 》中周云英，与斯琴高娃母女情深。《 [[ 恋恋不忘 ]] 》中厉芷宁一角 ，《 [[ 红酒俏佳人 ]] 》中赵母，《 [[ 甜蜜都市 ]] 》中刘敏 。

2014年，由著名导演杨亚洲执导的都市温情剧《 [[ 嘿，老头 ]] 》目前正在北京紧张拍摄中。吴玉芳应杨导之邀客串剧中李小花一角。在青春巨制《 [[ 长大 ]] 》中演绎一回小市民本色暴露无遗的清高女教授叶岚英。6月，在成都参加拍摄《 [[ 大爱无垠 ]] 》又名《 [[ 高墙花 ]] 》，饰演女市长陈文娟。7月参加拍摄电视剧《 [[ 许愿清单 ]] 》饰演家龙妈妈吴玉娟。同年还拍摄了新农村题材电视剧《 [[ 守婚 ]] 》及刘新导演的《 [[ 婚战 ]] 》。

2018年，参演余丁执导的《 [[ 激荡 ]] 》，饰演陈建的妈妈。在《 [[ 悲伤逆流成河 ]] 》中饰演齐铭妈妈李宛心 。出演在CCTV1黄金档中播出的《 [[ 远方的家 ]] 》嫂子周桂云。

2019年8月16日上映的电影《 [[ 送我上青云 ]] 》中饰演“梁美枝”。

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