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托斯卡
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托斯卡由於不放心又回來找卡瓦拉多希，但卻遇到曾經垂涎於她的斯卡皮亞，她的臉上露出厭惡的表情，但心懷詭計的警察局長熱情迎上前向她問好。斯卡皮亞把自己剛剛找到的侯爵夫人的扇子拿給托斯卡看，並極力的添油加醋，認為卡瓦拉多希背叛自己的托斯卡流著眼淚發誓要報復。托斯卡離開，教堂里漸漸人多起來，人們來做禱告。斯卡皮亞派人跟蹤托斯卡，看著落入他圈套的女人，斯卡皮亞笑起來，那聲音令人毛骨悚然（Va，Tosca!）。
===第二幕===
在法爾內塞宮樓上的秘密警察局長的房間裡，斯卡皮亞邊吃飯邊幻想著能夠按照自己意願征服托斯卡時的那種幾近病態的快感（Ha pi Forte Sapore）。
這時跟蹤托斯卡的人回來，他報告說沒有發現安吉羅提，但抓來了卡瓦拉多希。樓下正在舉行皇家慶祝活動，傳來了托斯卡的歌聲，音樂會結束後，托斯卡上來，斯卡皮亞吩咐將卡瓦拉多希帶到隔壁的房間。聽到驕傲的卡瓦拉多希受到酷刑所發出的呻吟聲，托斯卡再也受不了了，她說出了安吉羅提的藏身之處。卡瓦拉多希被帶出來後，意識到發生了什麼事，他嚴厲指責托斯卡。這時一個官員衝進來說拿破崙打贏了戰爭（Battle of Marengo），卡瓦拉多希情不自禁的歡呼勝利（Vittoria!）。
斯卡皮亞命令將他押入大牢。看看托斯卡，斯卡皮亞邪惡的微笑著走向她，表示她可以用自己來換得卡瓦拉多希的生命，托斯卡推開他。可憐的女人在心中向上帝訴求，為何她的命運如此悲慘（Vissi d`arte，為了藝術為了愛）。一個秘密警察進來報告說在圍捕過程中安吉羅提輕生了。
托斯卡低著頭臉色蒼白，她對斯卡皮亞表示願意屈服，斯卡皮亞答應只是形式上的處決卡瓦拉多希，暗地裡再將他放走，托斯卡要求他再寫一張通行證給他們。當斯卡皮亞簽字的時候，托斯卡拿起桌上的一把餐刀刺進斯卡皮亞的身體，並從他漸漸堅硬的手指中拿出通行證，在他的頭邊點了一根蠟燭，放一個小十字架在他的胸口，托斯卡逃離房間。