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动物疫病病原精确定量与标准物质研制技术动物疫病是制约我国畜牧业健康发展的一个重要因素，一些人畜共患疫病如禽流感和布病等还威胁到人类健康，同时也对食品安全造成影响。

一、技术名称

动物疫病病原精确定量与标准物质研制技术

二、技术概述

（一）研发背景

动物疫病是制约我国畜牧业健康发展的一个重要因素，一些人畜共患疫病如禽流感和布病等还威胁到人类健康，同时也对食品安全造成影响。早期精确的实验室检测是防控各类动物疫病和对其进行净化的有效手段。检测用标准物质是提高实验室的检测水平和标准化、保证检测结果质量的有力工具。本成果研发了非洲猪瘟、高致病性猪蓝耳病等系列动物疫病病原的高灵敏度精确定量的检测技术，同时将该技术应用于动物疫病检测用标准物质的研制。本成果解决了动物疫病病原的精确定量检测技术和实验室缺乏检测用标准物质的问题。

（二）技术要点及参数

本成果研发了非洲猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒（猪蓝耳病）、伪狂犬病毒和圆环病毒等病原的数字PCR检测技术，该技术可以实现对病原体精确数量的检测，检测灵敏度可低至1拷贝每微升。同时应用这项技术，研制了非洲猪瘟病毒B646L基因质粒标准物质（GBW（E）091034）、猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲株（PRRSV LV）核酸标准物质（GBW（E）090928）；猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲变异株（PRRSV JXA1）核酸标准物质（GBW（E）090929）；猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲经典株（PRRSV VR2332）核酸标准物质（GBW（E）090930）并获得国家标准证书。研制的标准物质具有精确量值，具有计量溯源性，足够的均匀和稳定，与临床样品无基质效应，与常规核酸检测方法具有互通性。可用于动物疫病检测实验室的实验室内的质量控制和实验室间的质量评价、检测方法验证。

（三）技术示范推广情况

本成果研发多种重大动物疫病的精确定量技术，即数字PCR检测方法，形成多个中国兽医协会团体标准，如《T/CVMA6-2018高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒微滴式数字RT-PCR检测方法》、《T/CVMA7-2018猪繁殖与呼吸综合征病毒微滴式数字RT-PCR检测方法》、《T/CVMA8-2018动物A型流感病毒微滴式数字RT-PCR检测方法》、《T/CVMA9-2018猪圆环病毒I型微滴式数字PCR检测方法》、《T/CVMA10-2018猪圆环病毒Ⅱ型微滴式数字PCR检测方法》、《T/CVMA11-2018伪狂犬病毒微滴式数字PCR检测方法》、《T/CVMA27-2020 非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法》和《T/CVMA 28-2020猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法》等，为精确定量检测方法的标准化应用奠定基础。同时开发试剂盒，以便于后续进一步推广应用，目前《猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型、美洲型双重微滴数字PCR绝对定量检测试剂盒》已获得国家发明专利（专利号ZL 2017 1 0845507.0）。

在精确定量的基础上研发多种病毒核酸标准物质，一方面形成《T/CVMA3-2018兽医检测用核酸标准物质研制技术规范》，为后续标准物质研制提供科学参考；另一方面与公司合作进行产业化生产，在全国的动物疫病预防控制中心实验室、兽医第三方检测机构、屠宰场和大型养殖企业的检测实验室进行推广应用，保障了兽医检测实验室的检测质量，促进了我国动物疫病的防控工作。

三、适宜区域

全国范围内的开展动物疫病检测及监测工作的相关实验室。