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動物疫病病原精確定量與標準物質研製技術動物疫病是制約我國畜牧業健康發展的一個重要因素，一些人畜共患疫病如禽流感和布病等還威脅到人類健康，同時也對食品安全造成影響。

一、技術名稱

動物疫病病原精確定量與標準物質研製技術

二、技術概述

（一）研發背景

動物疫病是制約我國畜牧業健康發展的一個重要因素，一些人畜共患疫病如禽流感和布病等還威脅到人類健康，同時也對食品安全造成影響。早期精確的實驗室檢測是防控各類動物疫病和對其進行淨化的有效手段。檢測用標準物質是提高實驗室的檢測水平和標準化、保證檢測結果質量的有力工具。本成果研發了非洲豬瘟、高致病性豬藍耳病等系列動物疫病病原的高靈敏度精確定量的檢測技術，同時將該技術應用於動物疫病檢測用標準物質的研製。本成果解決了動物疫病病原的精確定量檢測技術和實驗室缺乏檢測用標準物質的問題。

（二）技術要點及參數

本成果研發了非洲豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合徵病毒（豬藍耳病）、偽狂犬病毒和圓環病毒等病原的數字PCR檢測技術，該技術可以實現對病原體精確數量的檢測，檢測靈敏度可低至1拷貝每微升。同時應用這項技術，研製了非洲豬瘟病毒B646L基因質粒標準物質（GBW（E）091034）、豬繁殖與呼吸綜合徵病毒歐洲株（PRRSV LV）核酸標準物質（GBW（E）090928）；豬繁殖與呼吸綜合徵病毒美洲變異株（PRRSV JXA1）核酸標準物質（GBW（E）090929）；豬繁殖與呼吸綜合徵病毒美洲經典株（PRRSV VR2332）核酸標準物質（GBW（E）090930）並獲得國家標準證書。研製的標準物質具有精確量值，具有計量溯源性，足夠的均勻和穩定，與臨床樣品無基質效應，與常規核酸檢測方法具有互通性。可用於動物疫病檢測實驗室的實驗室內的質量控制和實驗室間的質量評價、檢測方法驗證。

（三）技術示範推廣情況

本成果研發多種重大動物疫病的精確定量技術，即數字PCR檢測方法，形成多個中國獸醫協會團體標準，如《T/CVMA6-2018高致病性豬繁殖與呼吸綜合徵病毒微滴式數字RT-PCR檢測方法》、《T/CVMA7-2018豬繁殖與呼吸綜合徵病毒微滴式數字RT-PCR檢測方法》、《T/CVMA8-2018動物A型流感病毒微滴式數字RT-PCR檢測方法》、《T/CVMA9-2018豬圓環病毒I型微滴式數字PCR檢測方法》、《T/CVMA10-2018豬圓環病毒Ⅱ型微滴式數字PCR檢測方法》、《T/CVMA11-2018偽狂犬病毒微滴式數字PCR檢測方法》、《T/CVMA27-2020 非洲豬瘟病毒微滴式數字PCR檢測方法》和《T/CVMA 28-2020豬瘟病毒微滴式數字PCR檢測方法》等，為精確定量檢測方法的標準化應用奠定基礎。同時開發試劑盒，以便於後續進一步推廣應用，目前《豬繁殖與呼吸綜合徵病毒歐洲型、美洲型雙重微滴數字PCR絕對定量檢測試劑盒》已獲得國家發明專利（專利號ZL 2017 1 0845507.0）。

在精確定量的基礎上研發多種病毒核酸標準物質，一方面形成《T/CVMA3-2018獸醫檢測用核酸標準物質研製技術規範》，為後續標準物質研製提供科學參考；另一方面與公司合作進行產業化生產，在全國的動物疫病預防控制中心實驗室、獸醫第三方檢測機構、屠宰場和大型養殖企業的檢測實驗室進行推廣應用，保障了獸醫檢測實驗室的檢測質量，促進了我國動物疫病的防控工作。

三、適宜區域

全國範圍內的開展動物疫病檢測及監測工作的相關實驗室。