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三羧酸循環（tricarboxylic acid cycle，TCA cycle）是需氧生物體內普遍存在的代謝途徑，分布在線粒體。

因為在這個循環中幾個主要的中間代謝物是含有三個羧基的有機酸，例如檸檬酸（C6），所以叫做三羧酸循環，又稱為檸檬酸循環（citric acid cycle）或者是TCA循環；或者以發現者Hans Adolf Krebs（英1953年獲得諾貝爾生理學或醫學獎）的姓名命名為Krebs循環。三羧酸循環是三大營養素（糖類、脂類、氨基酸）的最終代謝通路，又是糖類、脂類、氨基酸代謝聯繫的樞紐。

定義

三羧酸循環（tricarboxylic acid cycle ）是一個由一系列酶促反應構成的循環反應系統，在該反應過程中，首先由乙酰輔酶A（C2）與草酰乙酸（OAA）（C4）縮合生成含有3個羧基的檸檬酸（C6），經過4次脫氫（3分子NADH+H+和1分子FADH2），1次底物水平磷酸化，最終生成2分子CO2，並且重新生成草酰乙酸的循環反應過程。

基本介紹

檸檬酸循環（citric acid cycle）：也稱為三羧酸循環（tricarboxylic acid cycle，TCA循環，TCA），Krebs循環。是用於將乙酰CoA中的乙酰基氧化成二氧化碳和還原當量的酶促反應的循環系統，該循環的第一步是由乙酰CoA與草酰乙酸縮合形成檸檬酸。反應物乙酰輔酶A(Acetyl-CoA)(一分子輔酶A和一個乙酰相連)是糖類、脂類、氨基酸代謝的共同的中間產物，進入循環後會被分解最終生成產物二氧化碳並產生H，H將傳遞給輔酶I--尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) （或者叫煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）和黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD），使之成為NADH + H+和FADH2。 NADH + H+ 和 FADH2 攜帶H進入呼吸鏈，呼吸鏈將電子傳遞給O2產生水，同時偶聯氧化磷酸化產生ATP，提供能量。

真核生物的線粒體基質和原核生物的細胞質是三羧酸循環的場所。它是呼吸作用過程中的一步，之後高能電子在NAHD+H+和FADH2的輔助下通過電子傳遞鏈進行氧化磷酸化產生大量能量。

發現過程

克雷布斯博士在第二次世界大戰爆發期間因受到納粹的迫害，不得不逃往英國。雖然在德國，他是位非常優秀的醫生，但是在英國，由於沒有行醫許可證，得不到社會的承認，他只能轉而從事基礎醫學的研究。

剛開始選擇課題時，僅僅因為他對食物在體內究竟是如何變成水和二氧化碳這一課題充滿了興趣，他便毫不猶豫地選擇了這個課題，並且着手調查前人研究這一課題的各種材料。在報告中，他看到有的學者報告說：「A物質經過氧化變成了B物質。」又有學者說：「C物質經過氧化變成了D物質，然後又進一步變成E物質。」還有學者認為：「C物質是從B物質中得到的。或者可以說，是F物質變成了G物質。」另外一些學者則認為，是「G物質經過氧化變成A物質」等等。看着來自四面八方的研究報告，克雷布斯想，如果把這些零散的數據整理出來，說不定可以發現食物代謝的結構。就像玩解謎遊戲那樣，克雷布斯將這些數據仔細整理了一番，結果發現食物在體內是按F、G、A、B、C、D、E這樣一個順序變化的。再仔細了解從A到F這些化學物質，發現E和F之間斷了鏈。如果E和F之間存在一種X物質，那麼，這條食物循環反應鏈就完整了。馬上集中精力，全力尋找X物質。4年後終於查明，X物質就是如今放在飲料中作為酸味添加劑的檸檬酸。他完成了食物的循環鏈，並且將它命名為檸檬酸循環。克雷布斯的循環理論解釋了食物在體內進入檸檬酸循環後，按照A、B、C、D、E、X、F、G的順序循環反應，最終氧化成二氧化碳和水。他的偉大不僅僅在於發現了幾個化學物質的變化，而且在於將每一個活的變化整理出來，找出了可以解釋動態生命現象的結構。由於這一業績，他在1953年獲諾貝爾生理學或醫學獎。檸檬酸循環也叫三羧酸循環或TCA循環。進入體內的營養成分在糖酵解→檸檬酸循環→電子傳遞等一系列呼吸作用下得到分解，產生能量。

化學反應

乙酰輔酶A在循環中出現：檸檬酸(I)是循環中第一個產物，它是通過草酰乙酸(X)和乙酰輔酶A(XI)的乙酰基間的縮合反應生成的。如上所述，乙酰輔酶A是早先進行的糖酵解，氨基酸降解或脂肪酸氧化的一個產物。

總化學反應式

反應式 Acetyl-CoA + 3 NAD + FAD + GDP + Pi+ 2 H2O →CoA-SH + 3 NADH + 3 H + FADH2+ GTP + 2 CO2

值得注意的是，CO2的兩個C並不來源於乙酰CoA，而是OAA。

原理 兩個碳原子以CO2的形式離開循環。循環最後草酰乙酸會再次生成，再次從乙酰輔酶A中得到兩個碳原子。就是說，一分子六碳化合物（檸檬酸）經過多部反應分解成一分子四碳化合物（草酰乙酸）。草酰乙酸會在接下來的反應中遵循同樣的途徑獲得兩個碳原子，再次成為檸檬酸。

能量會在接下來的其中一步反應里以GTP的形式釋放（和ATP一樣，是細胞的能量貨幣）。但是循環中生成的氫載體（NADH + H and FADH2）將會在細胞呼吸鏈里釋放更多的能量 ，這也正是細胞呼吸的主要目的。檸檬酸循環的前提是，早先進行的糖酵解等過程能提供足夠的活化乙酸，以乙酰輔酶A的形式出現在循環。NADH+ H 和FADH2是輔酶，它們能攜帶質子和電子，並在需要的時候釋放它們。

循環中產生的總能量為一分子ATP（準確來說是：GTP），而細胞呼吸的全部四步反應（包括呼吸鏈中的內呼吸），一個葡萄糖分子則產生32分子的ATP。2002年之前一直認為是38ATP，當時認為一個FADH2可以產生2個ATP，一個NADH2可以產生3個ATP，這是理想化化學計算的結果。實測一個FADH2可以產生1.5個ATP，一個NADH2可以產生2.5個ATP。詳情請查閱電子傳遞鏈與氧化磷酸化。

如進行蘋果酸穿梭則不會減少能量，還是32ATP，在腦等部位會進行3磷酸甘油穿梭，減少2分子ATP，最終淨產生30ATP。所以說，在生物化學專業答題時需回答32或30。

循環過程

乙酰-CoA進入由一連串反應構成的循環體系，被氧化生成H₂O和CO₂。由於這個循環反應開始於乙酰CoA與草酰乙酸(oxaloaceticacid)縮合生成的含有三個羧基的檸檬酸，因此稱之為三羧酸循環或檸檬酸循環(citratecycle)。在三羧酸循環中，檸檬酸合成酶催化的反應是關鍵步驟，草酰乙酸的供應有利於循環順利進行。其詳細過程如下：

1、乙酰-CoA進入三羧酸循環

乙酰CoA具有硫酯鍵，乙酰基有足夠能量與草酰乙酸的羧基進行醛醇型縮合。首先檸檬酸合酶的組氨酸殘基作為鹼基與乙酰-CoA作用，使乙酰-CoA的甲基上失去一個H+，生成的碳陰離子對草酰乙酸的羰基碳進行親核攻擊，生成檸檬酰-CoA中間體，然後高能硫酯鍵水解放出遊離的檸檬酸，使反應不可逆地向右進行。該反應由檸檬酸合酶(citratesynthase)催化，是很強的放能反應。由草酰乙酸和乙酰-CoA合成檸檬酸是三羧酸循環的重要調節點，檸檬酸合酶是一個變構酶，ATP是檸檬酸合酶的變構抑制劑，此外，α-酮戊二酸、NADH能變構抑制其活性，長鏈脂酰-CoA也可抑制它的活性，AMP可對抗ATP的抑制而起激活作用。

2、異檸檬酸形成

檸檬酸的叔醇基不易氧化，轉變成異檸檬酸而使叔醇變成仲醇，就易於氧化，此反應由順烏頭酸酶催化，為一可逆反應。

3、第一次脫氫——異檸檬酸脫氫酶

在異檸檬酸脫氫酶作用下，異檸檬酸的仲醇氧化成羰基，生成草酰琥珀酸(oxalosuccinicacid)的中間產物，後者在同一酶表面，快速脫羧生成α-酮戊二酸(α-ketoglutarate)、NADH和CO2，此反應為β-氧化脫羧，此酶需要鎂離子作為激活劑。此反應是不可逆的，是三羧酸循環中的限速步驟，ADP是異檸檬酸脫氫酶的激活劑，而ATP，NADH是此酶的抑制劑。

4、第二次脫氫——α-酮戊二酸脫氫酶

在α-酮戊二酸脫氫酶系作用下，α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰-CoA、NADH·H+和CO₂，反應過程完全類似於丙酮酸脫氫酶系催化的氧化脫羧，屬於α-氧化脫羧，氧化產生的能量中一部分儲存於琥珀酰coa的高能硫酯鍵中。α-酮戊二酸脫氫酶系也由三個酶(α-酮戊二酸脫羧酶、硫辛酸琥珀酰基轉移酶、二氫硫辛酸脫氫酶)和五個輔酶(tpp、硫辛酸、hscoa、NAD+、FAD)組成。此反應也是不可逆的。α-酮戊二酸脫氫酶複合體受ATP、GTP、NADH和琥珀酰-CoA抑制，但其不受磷酸化/去磷酸化的調控。

5、底物磷酸化生成ATP

在琥珀酸硫激酶(succinatethiokinase)的作用下，琥珀酰-CoA的硫酯鍵水解，釋放的自由能用於合成gtp，在細菌和高等生物可直接生成ATP，在哺乳動物中，先生成GTP，再生成ATP，此時，琥珀酰-CoA生成琥珀酸和輔酶A。

6、第三次脫氫——琥珀酸脫氫酶

琥珀酸脫氫酶(succinatedehydrogenase)催化琥珀酸氧化成為延胡索酸。該酶結合在線粒體內膜上，而其他三羧酸循環的酶則都是存在線粒體基質中的，這酶含有鐵硫中心和共價結合的FAD，來自琥珀酸的電子通過FAD和鐵硫中心，然後進入電子傳遞鏈到O₂，丙二酸是琥珀酸的類似物，是琥珀酸脫氫酶強有力的競爭性抑制物，所以可以阻斷三羧酸循環。

7、延胡索酸的水化

延胡索酸酶僅對延胡索酸的反式雙鍵起作用，而對順丁烯二酸(馬來酸)則無催化作用，因而是高度立體特異性的。

8、第四次脫氫——蘋果酸脫氫酶（草酰乙酸再生）

在蘋果酸脫氫酶(malicdehydrogenase)作用下，蘋果酸仲醇基脫氫氧化成羰基，生成草酰乙酸(oxalocetate)，NAD+是脫氫酶的輔酶，接受氫成為NADH·H+(圖4-5)。

在此循環中，最初草酰乙酸因參加反應而消耗，但經過循環又重新生成。所以每循環一次，淨結果為1個乙酰基通過兩次脫羧而被消耗。循環中有機酸脫羧產生的二氧化碳，是機體中二氧化碳的主要來源。在三羧酸循環中，共有4次脫氫反應，脫下的氫原子以NADH+H+和FADH2的形式進入呼吸鏈，最後傳遞給氧生成水，在此過程中釋放的能量可以合成ATP。乙酰輔酶A不僅來自糖的分解，也可由脂肪酸和氨基酸的分解代謝中產生，都進入三羧酸循環徹底氧化。並且，凡是能轉變成三羧酸循環中任何一種中間代謝物的物質都能通過三羧酸循環而被氧化。所以三羧酸循環實際是糖、脂、蛋白質等有機物在生物體內末端氧化的共同途徑。三羧酸循環既是分解代謝途徑，但又為一些物質的生物合成提供了前體分子。如草酰乙酸是合成天冬氨酸的前體，α-酮戊二酸是合成穀氨酸的前體。一些氨基酸還可通過此途徑轉化成糖。

循環總結

乙酰-CoA+3NAD++FAD+ADP+Pi+CoA-SH—→2CO2+3NADH+FADH2+ATP+3H++CoA-SH

1、CO₂的生成，循環中有兩次脫羧基反應(反應3和反應4)兩次都同時有脫氫作用，但作用的機理不同，由異檸檬酸脫氫酶所催化的β氧化脫羧，輔酶是nad+，它們先使底物脫氫生成草酰琥珀酸，然後在Mn2+或Mg2+的協同下，脫去羧基，生成α-酮戊二酸。α-酮戊二酸脫氫酶系所催化的α氧化脫羧反應和前述丙酮酸脫氫酶系所催經的反應基本相同。應當指出，通過脫羧作用生成CO₂，是機體內產生CO₂的普遍規律，由此可見，機體CO₂的生成與體外燃燒生成Co2的過程截然不同。

2、三羧酸循環的四次脫氫，其中三對氫原子以NAD+為受氫體，一對以FAD為受氫體，分別還原生成NADH+H+和FADH2。它們又經線粒體內遞氫體系傳遞，最終與氧結合生成水，在此過程中釋放出來的能量使adp和pi結合生成ATP，凡NADH+H+參與的遞氫體系，每2H氧化成一分子H₂O，生成分子2.5ATP，而FADH2參與的遞氫體系則生成1.5分子ATP，再加上三羧酸循環中一次底物磷酸化產生一分子ATP，那麼，一分子檸檬酸參與三羧酸循環，直至循環終末共生成10分子ATP。

3、乙酰-CoA中乙酰基的碳原子，乙酰-CoA進入循環，與四碳受體分子草酰乙酸縮合，生成六碳的檸檬酸，在三羧酸循環中有二次脫羧生成2分子CO₂，與進入循環的二碳乙酰基的碳原子數相等，此時乙酰輔酶A中的2個碳已全部轉變為CO₂，同時其中的一部分能量已轉變成了NADH和ATP中的能量。

4、三羧酸循環的中間產物，從理論上講，可以循環不消耗，但是由於循環中的某些組成成分還可參與合成其他物質，而其他物質也可不斷通過多種途徑而生成中間產物，所以說三羧酸循環組成成分處於不斷更新之中。

下面以轉氨基作用偶聯尿素循環為例，TCA的中間產物可以作為其他代謝途徑的前體。

例如草酰乙酸——→天冬氨酸（Asp）

α－酮戊二酸——→穀氨酸（Glu）

草酰乙酸——→丙酮酸——→丙氨酸（Ala）

其中丙酮酸羧化酶催化的生成草酰乙酸的反應最為重要。因為草酰乙酸的含量多少，直接影響循環的速度，因此不斷補充草酰乙酸是使三羧酸循環得以順利進行的關鍵。三羧酸循環中生成的蘋果酸和草酰乙酸也可以脫羧生成丙酮酸，再參與合成許多其他物質或進一步氧化。

調節功能

糖有氧氧化分為兩個階段，第一階段糖酵解途徑的調節在糖酵解部分已探討過，下面主要討論第二階段丙酮酸氧化脫羧生成乙酰-CoA並進入三羧酸循環的一系列反應的調節。丙酮酸脫氫酶複合體、檸檬酸合成酶、異檸檬酸脫氫酶和α-酮戊二酸脫氫酶複合體是這一過程的限速酶。

丙酮酸脫氫酶複合體受別構調控也受化學修飾調控，該酶複合體受它的催化產物ATP、乙酰-CoA和NADH有力的抑制，這種別構抑制可被長鏈脂肪酸所增強，當進入三羧酸循環的乙酰-CoA減少，而AMP、CoA和NAD+堆積，酶複合體就被別構激活，除上述別位調節，在脊椎動物還有第二層次的調節，即酶蛋白的化學修飾，PDH含有兩個亞基，其中一個亞基上特定的一個絲氨酸殘基經磷酸化後，酶活性就受抑制，脫磷酸化活性就恢復，磷酸化-脫磷酸化作用是由特異的磷酸激酶和磷酸蛋白磷酸酶分別催化的，它們實際上也是丙酮酸酶複合體的組成，即前已述及的調節蛋白，激酶受ATP別構激活，當ATP高時，PDH就磷酸化而被激活，當ATP濃度下降，激酶活性也降低，而磷酸酶除去PDH上磷酸，PDH又被激活了。

對三羧酸循環中檸檬酸合成酶、異檸檬酸脫氫酶和α-酮戊二酸脫氫酶的調節，主要通過產物的反饋抑制來實現的，而三羧酸循環是機體產能的主要方式。因此ATP/ADP與NADH/NAD+兩者的比值是其主要調節物。ATP/ADP比值升高，抑制檸檬酸合成酶和異檸檬酶脫氫酶活性，反之ATP/ADP比值下降可激活上述兩個酶。NADH/NAD+比值升高抑制檸檬酸合成酶和α－酮戊二酸脫氫酶活性，除上述ATP/ADP與NADH/NAD+之外其它一些代謝產物對酶的活性也有影響，如檸檬酸抑制檸檬酸合成酶活性，而琥珀酰-CoA抑制α-酮戊二酸脫氫酶活性。總之，組織中代謝產物決定循環反應的速度，以便調節機體ATP和NADH濃度，保證機體能量供給。

生物學意義

TCA的生物學意義可以分為兩方面論述，1.能量代謝 2.物質代謝

1.三羧酸循環是機體將糖或其他物質氧化而獲得能量的最有效方式。在糖代謝中，糖經此途徑氧化產生的能量最多。毎分子葡萄糖經有氧氧化生成H2O和CO2時，可淨產生32分子ATP或30分子ATP。

2.三羧酸循環是糖、脂，蛋白質，甚至核酸代謝，聯絡與轉化的樞紐。

（1）此循環的中間產物（如草酰乙酸、α-酮戊二酸）是合成糖、氨基酸、脂肪等的原料。

其中OAA可以脫羧成為PEP，參與糖異生，重新合成生物體內的能源。acetylCOA可以合成丙二酰ACP，參與軟脂酸合成。OAA可以在轉氨酶的參與下，進行轉氨基作用，生成Asp，參與urea cycl，合成精氨酸代琥珀酸等尿素前體物質。其中某些代謝物質，還能參與嘌呤和嘧啶的合成，甚至合成卟啉ring，參與血紅蛋白合成。

（2）TCA是糖、蛋白質和、和脂肪徹底氧化分解的共同途徑：蛋白質的水解產物（如穀氨酸、天冬氨酸、丙氨酸等脫氨後或轉氨後的碳架）要通過三羧酸循環才能被徹底氧化，產生大量能量；脂肪分解後的產物脂肪酸經β-氧化後生成乙酰CoA以及甘油，甘油經過EMP途徑也生成乙酰CoA，最終也要經過三羧酸循環而被徹底氧化。糖代謝的所有途徑最後生成Pyruvate，脫氫成為acetyl-CoA，參與TCA。

綜上所述，三羧酸循環是聯繫三大物質代謝的，也是能量代謝的樞紐。