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| 抗凝劑 | |
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抗凝劑，應用物理或化學方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，稱為抗凝。能夠阻止血液凝固的化學試劑或物質，稱為抗凝劑或抗凝物質。 如天然抗凝劑(肝素，水蛭素等) Ca2+螯合劑(檸檬酸鈉，氟化鉀)[1]
基本信息
抗凝劑
醫療用途:治療靜脈炎，阻止血塊在靜脈里形成。
體育用途:避免促紅細胞生成素使血液變稠。[2]
應用物理或化學方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，稱為抗凝。能夠阻止血液凝固的化學試劑或物質，稱為抗凝劑或抗凝物質。
如天然抗凝劑(肝素，水蛭素等)
Ca鰲合劑(檸檬酸鈉，氟化鉀)
原理:使凝血酶原不能激活，Ca是凝血因子IV，其他的是蛋白類。
種類
乙二胺四乙酸
乙二胺四乙酸(EDTA)鹽 EDTA有二鈉、二鉀和三鉀鹽。均可與鈣離子結合成螯合物，從而阻止血液凝固。
EDTA鹽對紅、白細胞形態影響很小，根據國際血液學標準公委員會(International committee standard of hematology ,ICSH)1993年文件建議，血細胞計數用EDTA二鉀作抗凝劑，用量為EDTA-K2。2H2O1.5-2.2MG (4.45±0.85μmol)/ml血液。EDTA-NA與EDTA-K2對血細胞計數影響均較小，但二鈉溶解度明顯低於二鉀，有時影響抗凝效果，其他抗凝劑不適合於血細胞計數。表1-1是幾種抗凝劑對白細胞計數的影響，EDTA影響小板聚集，不適合於作凝血象檢查和血小板功能試驗。
草酸鈉(sodium oxalate)草酸鹽可與血中鈣離子生成草酸鈣沉澱，從而阻止血液凝固。
肝素(heparin)肝素廣泛在於肺、肝、脾等幾乎所有組織和血管周圍肥大細胞和嗜鹼性粒細胞的顆粒中。它是一種含硫酸基團的粘多糖，是分散物質，平均分子量為15000(2000-40000)。肝素可加強抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)滅活絲氨酸蛋白酶，從而具有阻止凝血酶形成，對抗凝血酶和阻止血小板聚集等多種作用。每毫升血液抗凝需要持素15±2.5IU 。儘管肝素可以保持紅細胞的自然形態，但由於其常可引起白細胞聚集關使用塗片在羅氏()染色時產生藍色背景，因此肝素抗凝血不適全血液學一般檢查。肝素是紅細胞透滲脆性試驗理想的抗凝劑。
枸櫞酸鈉(trisodium citrate)枸櫞酸鹽可與血中鈣離子形成可溶性螯合物，從而阻止血液凝固。
枸櫞酸鈉有2Na3C6H5O7。和2Na3C6H5。11H2O等多種晶體。通常用前者配成109mmol/l(32g/l)水溶液(也有用106mmol/l濃度)，與血液按1:9或1:4比例使用。枸椽鈉對凝血V因子有較好的保護作用，使其活性減低緩，故常用於凝血象的檢查，也用於紅細胞沉降率的測定。因毒性小，是輸積壓保養中的成分之一。[1]
臨床應用
EDTA
EDTA是臨檢工作中最常用和最重要的抗凝劑和試劑之一，其機制是通過與水相中的鈣離子形成穩定的螯合物而阻止血液凝固。EDTA的鹽類有鉀、鈉、鋰鹽、均溶於水，鉀鹽較鈉鹽的溶解度大，全血胞計數最好使用EDTA的鉀鹽。EDTA能影響某些酶的活性和抑制紅斑狼瘡因子，故不適於製作組化染色和檢查紅斑狼瘡細胞的血塗片。EDTA還會影響血小板聚集和白細胞吞噬功能，也不適於做止血學檢驗和血小板功能檢驗。用EDTA抗凝血製備的塗片對粒細胞形態有影響，其影響程度與抗凝血放置時間和抗凝劑濃度有關。按照ICSH建議EDTA的使用濃度為1.4~1.6g/L血液，迅速製備塗片，粒細胞形態特徵有微小的改變，有時細胞核分葉不見，細胞腫脹。如果用放置時間較長的血液製備的塗片可出現細胞漿內顆粒消失，胞漿和細胞核有空泡，染色質模糊不清。用大於1.5g/L血液濃度製備的血塗片，粒細胞可完全變性，對淋巴細胞和單核細胞也有影響，尤其是血小板，可出現腫脹、破裂而產生碎片，影響其計數，造成結果偏高。獲得血漿標本可通過不同的抗凝劑，肝素鋰作為抗凝劑在國外應用廣泛，而國內多使用肝素鈉、EDTA-K2抗凝，與國外有所不同。隨着臨床醫學的發展，近年來糖化血紅蛋白檢測項目的開展，也使用了EDTA-K2作為抗凝劑，從而減少了對結果的影響。
肝素
肝素是血液化學成分測定中最好的抗凝劑。肝素是一種含硫酸基團的黏多糖，分子量為1.5萬，其抗凝機制是與抗凝酶Ⅱ一起，在低濃度能抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之間的作用，並能加強抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成;還有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X的作用。肝素的鹽類有鈉、鋰、銨鹽。通常用肝素抗凝的劑量是10.0~12.5IU/mL血液。臨床常用肝素鋰，雖其價格較貴，但抗凝效果較好。因為肝素鈉能增加血漿鈉的含量，而肝素銨能增加尿素氨的含量。某些生化成分在血清和肝素抗凝的血漿中有明顯的區別。在凝血過程中由於紅細胞的溶解破壞使血清鉀的含量比血漿為高，由於血漿中含有Fg，其含量比血清高。因此，測定鉀離子時，注意血清與血漿之間的差異。另外肝素過量可引起白細胞聚集和血小板減少，故不適於白細胞分類和血小板計數，更不能用於止血學檢驗。通過試驗表明，採血時加入肝素鈉抗凝劑後，對測定血液中總蛋白質含量結果有較明顯的影響，會使其測得結果高於用血清測得總蛋白質3%~5%。但加入了抗凝劑後，其總蛋白含量低於血清總蛋白質含量，其原因是血液加入肝素鈉抗凝劑後，阻斷了凝血活酶的生成，阻止了血液凝固，導致纖維蛋白原不能水解轉化成纖維蛋白單體，有效阻止了纖維蛋白單體的形成，這些纖維蛋白原仍留在血漿中。而血清是血液經凝固後，纖維蛋白原水解轉化為纖維蛋白單體，並因凝固而消耗，離心後隨血細胞一併分離出去了。因此，血漿中的總蛋白質量是包含了纖維蛋白原在內的所有蛋白質，而血清中是不含有纖維蛋白原的總蛋白質含量，理論上應該低於血漿中的總蛋白含量。因此在進行血液總蛋白質含量測定時，最好以血清為標本，對一些急診標本，或是一些因其他原因急需測定的患者，需要用血漿做標本測定總蛋白時，在測出總蛋白後，應扣除纖維蛋白原的含量(一般扣除3%~5%)，這樣才能與以血清為標本測得的總蛋白含量一致，真實反映患者體內實際總蛋白質之含量。
枸櫞酸鹽
枸櫞酸鹽主要用於止血學檢驗及血沉的測定。因其毒性小，也用於輸血保養液中。其抗凝機制是枸椽酸鹽與血中鈣離子形成可溶性螯合物，從而阻止血液凝固，其反應式為Na3C6H5O7+Ca2+→CaC6H5+3Na+。其鹽類主要是鈉鹽。枸緣酸鈉有Na3C6H5O7ZH?5O和2Na3C6H5O7+1H2O2種晶體，通常用前者配製0.129 mol/L(3.8%)或0.109mol/L(3.2%)的血溶液，與血液按1:9使用。對於用於監測口服華法令等抗凝劑治療的患者，測定PT、APTT所用的枸緣酸鈉濃度(3.2%或3.8%)不應隨意改變，因為可能影響到國際標準化比值(INR)。一般用濃度0.129mol/L的枸緣酸鈉比用0.109mol/L濃度時INP值要高些，另外對不同來源的凝血活酶試劑，對同一正常人或患者血漿的凝固時間可以相差很大。因此每個實驗室所使用的凝血活酶試劑的來源應儘可能恆定，配製操作方法應規範化，否則會使凝固時間延長或縮短，或使正常值無規律性。有條件的實驗室可採用緩衝抗凝劑，這種試劑對標本經冷凍保存後再進行分析更為適宜。緩衝劑的作用是維持血漿恆定pH值，防止易變因子失活。[2]
配製
EDTA
常用EDTA的鈉鹽或鉀鹽作為抗凝劑，能與血液中的鈣離子結合成螯合物，而使鈣離子失去凝血作用，從而阻止血液凝固。
肝素
1%肝素溶液0.1ml於試管內，旋轉試管，使溶液均勻浸濕試管內壁，放入80~100℃烘箱烤乾，每管能使5~10ml血液不凝。急性血壓實驗時可在充滿生理鹽水的動脈套管內注入肝素20~25mg。體內抗凝:500~1000u/kg。 市售的肝素注射液每1ml含肝素12500u(相當於肝素鈉125mg，即1mg相當於100u)。應置冰箱內保存。
枸櫞酸鈉
枸櫞酸鈉 3.8%的枸櫞酸鈉溶液1份可使9份血液不凝，用於紅細胞沉降速率的測定。因其抗凝血作用較弱而鹼性較強，不適用於供化驗用的血液樣品。做急性血壓實驗時則用5~7%的枸櫞酸鈉溶液。
草酸鉀
草酸鉀常用於供檢驗用血液樣品的抗凝。在試管內加飽和草酸鉀溶液2滴(或10%溶液0.2ml)，輕輕敲擊試管，使溶液分散到管壁四周，置80℃以下的烘箱中烤乾(烘烤溫度過高，可使草酸鉀分解為碳酸鉀而失效)，每管能使3~5ml血液不凝。供鉀、鈣含量測定的血樣不能用草酸鉀抗凝。
關於保存:新鮮冰凍血漿在-20℃以下可保存1年
原理
不同的抗凝劑其抗凝原理略有不同。
乙二胺四乙酸(EDTA)與枸櫞酸鹽的抗凝原理相同:是與血液中Ca離子結合成螯合物，使Ca失去活性，中斷凝血過程，從而達到抗凝的目的。
肝素是通過加強抗凝血酶Ⅲ，滅活絲氨酸蛋白酶，阻止凝血酶的形成來達到抗凝的目的。
草酸鹽是通過其草酸根與血液中的Ca離子形成草酸鈣沉澱，使其無凝血功能。