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Taq聚合酶
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Taq聚合酶的缺點之一為催化DNA合成時的相對低保真性。它缺乏3』→5』核酸外切酶的即時校正機制,出錯率為1/90000。
應用
水生棲熱菌是一種生長在溫泉、蒸汽管道等處的細菌,它體內的Taq聚合酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,這在需要高溫環境的PCR反應中有着重要意義。因此Taq聚合酶取代了之前常用於PCR反應的大腸埃希菌中的DNA聚合酶。PCR反應中應用Taq聚合酶,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷,大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,並逐步應用於臨床。
一般適用於DNA片段的PCR擴增、DNA標記、引物延伸、序列測定、平末端加A等,產物可直接用於T-A克隆載體。
酶單位
1單位(U)Taq DNA 聚合酶活力定義為在74°C、30分鐘內,以活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,將10nmol脫氧核苷酸摻入到酸不容物質所需的酶量。
發現
托馬斯·D·布洛克(Thomas D. Brock)團隊於1965年在美國黃石公園裡熱泉中發現並成功分離嗜熱細菌海棲熱袍菌(Thermus aquaticus)。Taq聚合酶是我國台灣科學家錢嘉韻女士所分離,錢嘉韻是第一個報道分離耐高溫DNA聚合酶工作的,1973年,錢嘉韻(Alice Chien)就讀於美國俄亥俄州辛辛那提大學生物系,她的導師對Thermus aquaticus十分好奇,就讓錢嘉韻以該細菌作為研究主題。在另一位老師的指導下,錢學會了從細胞中分離蛋白質,成功分離出該細菌耐高溫的TaqDNA聚合酶。Taq聚合酶是從嗜熱細菌海棲熱袍菌(Thermus aquaticus)中分離出的DNA聚合酶。
Chien A, Edgar DB, Trela JM (1976)."Deoxyribonucleic acid polymerase from the extreme
thermophile Thermus aquaticusJ. Bact.127(3): 1550–7.
Brock, Thomas D.; Hudson Freeze (August 1969)."Thermus aquaticus gen. n. and sp. n., a
nonsporulating extreme thermophile"Journal of Bacteriology(American Society for
Microbiology)98(1): 289–297.
Brock, Thomas D. (15 May 1964). "Knots in Leucothrix mucor".Science144(3620): 870–872.[1]