展開劑
提取分離時,用來分離極性不同的兩種物質的溶劑叫做展開劑,選擇適當的展開劑是首要任務。一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為:石油醚<己烷<苯<乙醚。
- 中文名:展開劑
- 外文名Developing solvent
目錄
英語
展開劑 :Developing solvent
以下是常用展開劑的英文名稱:
Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether, Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate
選擇條件
展開劑的比例要靠嘗試.一般根據文獻中報道的該類化合物用什麼樣的展開劑,就首先嘗試使用該類展開劑,然後不斷嘗試比例,直到找到一個分離效果好的展開劑。展開劑的選擇條件:①對所需成分有良好的溶解性;②可使成分間分開;③待測組分的Rf在0.2~0.8之間,定量測定在0.3~0.5之間;④不與待測組分或吸附劑發生化學反應;⑤沸點適中,黏度較小;⑥展開後組分斑點圓且集中;⑦混合溶劑最好用新鮮配製。
用途
一般來說,弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成,再根據需要加入甲醇、乙醇,乙酸乙酯來調節溶劑系統的極性,以達到好的分離效果,適合於生物鹼、黃酮、萜類等的分離;中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成,由甲醇、乙醇,乙酸乙酯等來調節,適合於蒽醌、香豆素,以及一些極性較大的木脂素和萜類的分離;強極性溶劑,由正丁醇和水組成,也靠甲醇、乙醇,乙酸乙酯等來調節,適合於極性很大的生物鹼類化合物的分離。
選擇方法
很多時候,展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達到最佳效果。我們在實驗中,為了實現一個配體與其他雜質有效分離,曾經嘗試了很多種的溶劑組合,最後才找到石油醚—EtOAc—HCOOH(5.5:3.5:0.1)混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時,採用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分開的跡象,再調整比例(或者加入第三種溶劑),達到最佳效果;如果沒有分開的跡象(斑點較「拖」),最好是換溶劑。對於在硅膠中這種酸性物質上易分解的物質,在展開劑里往往加一點點三乙胺,氨水,吡啶等鹼性物質來中和硅膠的酸性。(選擇所添加的鹼性物質,還必須考慮容易從產品中除去,氨水無疑是較好的選擇。)分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質量很有關係:不同廠家生產的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細程度,酸性強弱不同,從而導致產品在某個廠家的硅膠中分離效果很好,但在另一個廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質含量對分離效果都有明顯的影響。溫度,濕度對分離效果影響也很明顯,在實驗中我們發現有時同一展開條件,上下午的Rf截然不同
展開劑的選擇主要根據樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮
在進行薄層層析時,首先應該知道未知化學成分的類型,其極性的大致歸屬,從提取液或從色譜柱的流動相極性可知,另外某樣品里含多種化學成分先按極性不同大致分,然後細分,對於分離未知的化學物質,展開劑的選擇也是一個摸索的過程,不應該僅僅從展開劑考慮,多因素綜合衡量!
展開劑溶劑
溶劑:層析過程中溶劑的選擇,對組分分離關係極大。在柱層析時所用的溶劑(單一劑或混合溶劑)習慣上稱洗脫劑,用於薄層或紙層析時常稱展開劑。洗脫劑的選擇,須根據被分離物質與所選用的吸附劑性質這兩者結合起來加以考慮。在用極性吸附劑進行層析時,當被分離物質為弱極性物質,一般選用弱極性溶劑為洗脫劑;被分離物質為強極性成分,則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質用吸附性較弱的吸附劑(如以硅藻土或滑石粉代替硅膠),則洗脫劑的極性亦須相應降低。
柱層試驗
在柱層操作時,被分離樣品在加樣時可採用於法,亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解後加入。溶解樣品的溶劑應選擇極性較小的,以便被分離的成分可以被吸附。然後漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個十分緩慢的過程,稱為「梯度洗脫」,使吸附在層析柱上的各個成分逐個被洗脫。如果極性增大過快(梯度太大),就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力,有時可以用溶劑的介電常數(ε)來表示。介電常數高,洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用於極性吸附劑,如硅膠、氧化鋁。對非極性吸附劑,如活性炭,則正好與上述順序相反,在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用,較在脂溶性溶劑中為強。
被分離物質的性質:被分離的物質與吸附劑,洗脫劑共同構成吸附層析中的三個要素,彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下,各個成分的分離情況,直接與被分離物質的結構與性質有關。對極性吸附劑而言,成分的極性大,吸附性強。
當然,中草藥成分的整體分子觀是重要的,例如極性基團的數目愈多,被吸附的住能就會更大些,在同系物中碳原子數目少些,被吸附也會強些。總之,只要兩個成分在結構上存在差別,就有可能分離,關鍵在於條件的選擇。要根據被分離物質的性質,吸附劑的吸附強度,與溶劑的性質這三者的相互關係來考慮。首先要考慮被分離物質的極性。如被分離物質極性很小為不含氧的萜烯,或雖含氧但非極性基團,則需選用吸附性較強的吸附劑,並用弱極性溶劑如石油醚或苯進行洗脫。但多數中藥成分的極性較大,則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑(一般Ⅲ~Ⅳ級)。採用的洗脫劑極性應由小到大按某一梯度遞增,或可應用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統中的分離情況。此外,能否獲得滿意的分離,還與選擇的溶劑梯度有很大關係。現以實例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關係。如有多組分的混合物,象植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。當以硅膠為吸附劑時,使油脂被吸附後選用一系列混合溶劑進行洗脫,油脂中各單一成分即可按其極性大小的不同依次被洗脫。
又如對於C-27甾體皂甙元類成分,能因其分字中羥基數目的多少而獲得分離:將混合皂甙元溶於含有5%氯仿的苯中,加於氧化鋁的吸附柱上,採用以下的溶劑進行梯度洗脫。如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁,由於硅酸鎂的吸附性較弱,洗脫劑的極牲需相應降低,亦即採用苯或含5%氯仿的苯,即可將一元羥基皂甙元從吸附劑上洗脫下來。這一例子說明,同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時,需用不同的溶劑才能達到相同的分離效果,從而說明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關係。
薄層層析
簿層層析:薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上,形成一薄層進行層析時一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。
1.薄層層析的特點:薄層層析在應用與操作方面的特點與柱層析的比較[1] 。
2.吸附劑的選擇:薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區別在於薄層層析要求吸附劑(支持劑)的粒度更細,一般應小於250目,並要求粒度均勻。用於薄層層析的吸附劑或預製薄層一般活度不宜過高,以Ⅱ~Ⅲ級為宜。而展開距離則隨薄層的粒度粗細而定,薄層粒度越細,展開距離相應縮短,一般不超過10厘米,否則可引起色譜擴散影響分離效果。
3.展開劑的選擇:薄層層析,當吸附劑活度為一定值時(如Ⅱ或Ⅲ級),對多組分的樣品能否獲得滿意的分離,決定於展開劑的選擇。中草藥化學成分在脂溶性成分中,大致可按其極性不同而分為無極性、弱極性、中極性與強極性。但在實際工作中,經常需要利用溶劑的極性大小,對展開劑的極性予以調整。
視頻
1,3-癸二烯的製備與表徵 Moolsnet