血清
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中文名稱 ：血清 定 義 ：指纖維蛋白原已被除去的血漿 作 用 ：提供激素和各種生長因子等 |
血清( serum )，指血液凝固後，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子後分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和生長因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞起到某些保護作用。[1]
目錄
主要成分
- 血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很複雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸鹼度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學成分組成,這些化學成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展，但仍存在一些問題。主要是:
- 第一:血清的成份可能有幾百種之多，對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認識，這給研究工作帶來許多困難;
- 第二:血清都是批量生產，各批量之間差異很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保證每批血清的相似性極為困難，從而使實驗的標準化和連續性受到限制;
- 第三:不能排除血清中含有易變物質，這被認為是"瓶中惡化"的原因之一。
主要作用
- 提供基本營養物質:氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質。
- 提供激素和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質激素(氫化可的松、地塞米松)、類固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。
- 提供結合蛋白:結合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉鐵蛋白攜帶鐵。結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。
- 提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。
- 對培養中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞，如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發現的，則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經被廣泛用於貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養攪拌時，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。
鑑別方法
血清
血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可於凝血後經離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿最大的區別。而在凝血反應中，血小板釋放出許多物質，各凝血因子也都發生了變化。這些成分都留在血清中並繼續發生變化，如凝血酶原變成凝血酶，並隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區別之處。但大量未參加凝血反應的物質則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學成分的分析，都以血清為樣品。[2]
血漿
血漿是血液的液體成分，血細胞懸濁於其中。人體含有2750-3300毫升血漿，約占血液總體積的55%。血漿的絕大部分是水(體積的90%)，其中溶解的物質主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要功能是運載血細胞，同時也是運輸分泌產物的主要媒介。將新鮮血液離心，使血細胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。
常見問題
保存方法
- 血清應保存在-5℃至-20℃。然而，若存放於4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議將無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。
- 如何解凍血清才不會使產品質量受損?
- 將血清從冷凍箱取出後，先置於2-8℃冰箱使之溶解，然後在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規則地搖晃均勻。
避免產生沉澱物
- 1、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實驗顯示非常容易產生沉澱物。
- 2、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉澱的發生
- 3、請勿將血清置於37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。
- 4、血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
- 5、若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，並且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉澱物的增多。 血清解凍後發現有絮狀沉澱物出現，該如何處理? 欲去除這些絮狀沉澱物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心，上清液即可接着加入培養基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉澱物，因為它可能會阻塞過濾膜。
何謂熱滅活
一般是以56℃，30分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應有:溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。有必要做熱滅活嗎？實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉澱物的形成會顯著的增多，這些沉澱物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉澱物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。購買的時候注意詢問廠家是否是已滅活血清。
保存注意事項
- 血清的保存應該注意以下幾點:
- (1)需要長期保存的血清必須儲存於-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由於血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂.
- (2)熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉澱物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化.
- (3)瓶裝血清解凍需採用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然後移入室溫,待全部溶解後再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉澱的發生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉澱.
- (4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清.
- (5)血清中的沉澱物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍後血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉澱物的形成會顯著增多.有些沉澱物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清.
- (6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質量.[3]
相關視頻
血清和血漿的區別